上海延慕实业有限公司

https://fanketech.biomart.cn

公众号

扫一扫
进入手机商铺

产品分类
公司荣誉
公司图片
联系方式
 公司地址
上海市浦东新区川沙镇5245弄
邮编:201200
 联系电话
登录查看商家电话
 传真号码
021-50760790
 电子邮箱
fankesw@****com登录查看商家邮箱
 公司网址
http://www.ym-sw.com
点击这里给我发消息
公司新闻

细胞污染的来源、危害以及防治污染方法

发布时间:2021-08-18 10:25 |  点击次数:

用好的血清,细胞一定状态良好?养细胞细心、体贴像照顾小孩纸,细胞一定「平平安安」?但 MTT 等一些细胞实验结果却异常。因为你的细胞已悄悄被支原体污染了。

支原体是一种生命力顽强的细菌,它和其他细菌的区别在于,支原体没有细胞壁,只有柔软的细胞膜。娇小的身材(0.15-0.3μm)让它可以轻松穿过滤器。

由于身形小,培养物不会表现出浑浊或其他明显可见的特征,因此支原体很容易被忽视。但支原体其实已经随着操作者的操作「偷偷地」潜入超净工作台,并附着在血球计数器、移液器、废液缸等物体表面。

常见的支原体污染来源有:

1. 受污染的培养基、血清、或试剂

2. 不彻底的灭菌

3. 培养箱:目前常见的培养箱都带有通气扇和 CO2 瓶,在开、关内门的过程中,被支原体污染的颗粒会被扰动,可能造成细胞污染。其他实验设备的使用也可能造成污染颗粒的扰动,如移液器、离心机等。

4. 液氮

液氮也可以成为传播支原体的媒介。支原体具有顽强的生命力,即使没有经过低温冷藏过程,支原体也可以在液氮里存活。在液氮中,支原体虽然不会增殖,但是仍可以污染保存在其中的细胞,因此建议将冻存管保存在液氮罐的气相层中。

5. 空气悬浮物

在培养过程中产生的悬浮颗粒是微生物污染的最主要来源,一些常见的仪器或普通的实验操作都会产生这些颗粒,例如移液器、真空泵、离心机、冰箱等。携带微生物的颗粒直径多在 4-28μm 之间,在静止空气中,它们以 30 cm/min 的速率移动,因此在密闭、不通风的房间或实验室内,基本不会造成生物污染。

但是,当实验者进入房间时,沉积的颗粒会被扰动,悬浮起来的颗粒则有可能污染细胞。因此严格的无菌操作意识很重要。此外,实验动物也会带来一些被污染的悬浮颗粒。

除上述的情况外,滥用抗生素、密封不严、受污染细胞等也都可能是支原体污染的来源。

支原体污染的危害:

1. 支原体导致细胞密度的减少,并引发细胞不可逆的退化。

2. 支原体吸收、破坏培养基中的精氨酸,抑制细胞生长、引发细胞凋亡,造成细胞活性降低、细胞脱落等现象 。更有甚者,也可能导致染色体畸变,因为精氨酸是细胞核内组蛋白的重要成分。

3. 支原体对 MTT 有还原作用,因此常规的细胞毒性实验 MTT 实验的结果会受到支原体的严重干扰;某些支原体也可以直接诱导树突状细胞的成熟,这对于人体免疫细胞的肿瘤治疗来说,无疑是一个灾难;除此之外,支原体的存在可以显着改变数百个基因的表达水平。

由此可见,支原体不仅影响细胞的健康,也会影响细胞实验的结果。因此,有必要定期检测支原体。

建议在引进新细胞、冻存细胞前或发生细胞房污染等情况时,及时对细胞进行支原体检测,平时对正常培养的细胞也有定期检测的必要,以做到及时发现,及时处理,避免更大的损失。

防止污染的方法

1. 改进无菌技术、严格无菌操作

对新进实验室的人员,要由有经验的人员帮带,严格监督其实验操作;此外建议记录每一次的污染事件,以便分析解决污染问题。

2. 检测外来细胞

因为外来的细胞携带污染很常见,因此,选择可靠的细胞来源非常重要。

在没有独立细胞培养箱的情况下,可疑的细胞培养物应培养在带盖的培养瓶中,不要使用培养板或没有密封的培养皿。此外,处理这类细胞应在一天工作都结束后进行,并且使用独立的培养基和试剂,最后还要对超净工作台进行彻底除菌。

其他方面,如减少悬浮物产生、正确使用抗生素、定期进行支原体检测等,对于防止污染也尤为重要。