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抗体检测常用的几种方法

人阅读 发布时间:2020-06-24 10:37

    一、直接法

    将抗原直接固定在固相载体上,参加酶符号的一级抗体,即可测定抗原总量,此一级抗体的特异性非常重要。

    1. 优势:操作手续简略,因无须运用二抗可防止交互反响。

    2. 缺陷:实验中的一抗都得用酶符号,但不是每种抗体都适合做符号,费用相对进步。

    二、间接法

    此测定办法与直接法相似,不一样在于一级抗体没有酶符号,改用酶符号的二级抗体去辨识一级抗体来测定抗原量。

    1. 优势:二抗能够加强信号,并且有多种挑选能做不一样的测定剖析。不加酶符号的一级抗体则能保存它最多的免疫反响性。

    2. 缺陷:交互反响发作的机率较高。

    三、双抗体夹心法

    被检测的抗原包被在两个抗体之间,其间一个抗体将抗原固定于固相载体上,即捕捉抗体。另一个则是检测抗体,此抗体可用酶符号后直接测定抗原的量;或不符号,再透过酶符的二级抗体来测定抗原的量。这两种抗体有必要当心选择,才可防止交互反响或竞争一样的抗原部位。

    1. 优势:高活络、高专一性,抗原无须事前纯化。

    2. 缺陷:抗原必定得具有两个以上的抗体部位。

    四、根据细胞法(zui新ELISA技术)

    是一种新的定性蛋白检测技术,将细胞直接在微孔板里培育,待检测时,不需抽提蛋白和裂解细胞,便可直接丈量微孔板里蛋白经影响或抑制作用后的改变。

    1. 优势:无需裂解细胞,所以方针蛋白丢失zui少,可测定完好细胞、黏附细胞、还有非粘附细胞。

    2. 缺陷:不能测定抗原量。

    五、竞争法

    样本里的抗原(自在抗原)和纯化并固定在固相载体上的抗原(固定抗原)一同竞争一样的抗体,当样品里的自在抗原越多,就能够越多的抗体,而固定抗原就只能到较少的抗体,反之亦然。经清洁过程,洗去自在抗原和抗体的复合物,只留下固定抗原和抗体的复合物,拿来与只要固定抗原的对照组成果相比拟,依据呈色区别就可计算出样品里的抗原含量。

    1. 优势:可适用比拟不纯的样本,并且数据再现性很高。

    2. 缺陷:全体的敏感性和专一性都较差。

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